Resumo

Bactérias do gênero Vibrio fazem parte da microbiota normal dos camarões, pois têm capacidade de associar-se à quitina e são facilmente incorporados a bivalves durante o processo de filtração da água. O gênero contém pelo menos 12 espécies patogênicas, incluindo V. cholerae, responsável por várias pandemias de cólera. A contaminação acontece através do consumo de alimentos, principalmente de origem marinha, crus ou mal cozidos. Por se tratar de um tipo de pescado amplamente consumido pela população, este trabalho tem como objetivo investigar a presença de 4 espécies de Vibrio em camarões e mexilhões comercializados in natura na cidade de São Gonçalo/RJ caracterizando seus perfis moleculares e de resistência a antibiótico. Para isto, vinte e cinco gramas de camarão ou mexilhão foram pesados assepticamente e adicionados a 225 ml de APA (Água peptonada alcalina), acrescidos de 1 e 3% de NaCl e incubados a 37 °C por 18 a 24 horas. Após este período, uma alíquota de 100 µl foi inoculada em 10 ml de meio BHI nas concentrações de 1 e 3% de NaCl e incubada a 37º por 24 h. Ao término da incubação, alçadas desta cultura foram utilizadas para inocular o meio Ágar TCBS para diferenciação de colônias bacterianas fermentadoras e não fermentadoras de sacarose. Após incubação a 37 °C por um período de 18 a 24 horas, as colônias foram isoladas em Agar nutriente a 1 e 3% de NaCl e incubadas novamente por 24 horas para o teste com a enzima citicromo-oxidase, cuja presença caracteriza a família Vibrionaceae. As colônias oxidase positivas foram testadas para a sensibilidade ao agente vibriostático O/129 (2,4 diamino-6,7 diisopropil- pteridina). Visando confirmar a identidade das espécies de Vibrio (V.cholerae, V.mimicus, V.parahaemolyticus, V.vulnificus) as amostras foram submetidas ao multiplex PCR sob as condições descritas em Tarr et al (2006). Visando analisar diferenças de perfil molecular entre os isolados pertencentes às diferentes espécies de Vibrio, estes foram submetidos à ribotipagem por PCR tendo como alvo o gene 16S rRNA. Até agora, 104 isolados testaram positivamente para os provas bioquímicas realizadas, 15 isolados amplificaram um fragmento de 897 pb, o que indica a presença de V. parahaemolyticus e 6 amplificaram um fragmento de 248 pb, que corresponde a V.cholerae. Dentre os demais isolados, 45 amplificaram um fragmento de 663 pb que caracteriza bactérias do gênero Vibrio, no entanto, não observamos qualquer amplificação espécie-específica após terem sido submetidos ao PCR multiplex, o que sugere tratar-se de outras espécies de Vibrio não investigadas neste trabalho. Os isolados de V.cholerae e V.parahaemolyticus serão agora investigados para a presença dos principais genes de virulência e terão seus perfis de resistência a antimicrobianos investigados.